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西美杰病毒包裝方案:五大流程,一個(gè)對策!

 不論是細(xì)胞治療還是基因治療都離不開病毒載體。目前使用較多的病毒載體類型包括:腺相關(guān)病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆轉(zhuǎn)錄病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,這些常用病毒載體特性如下圖所示:

特征
慢病毒
Lentivirus
逆轉(zhuǎn)錄病毒
Retrovirus
腺相關(guān)病毒
AAV
腺病毒
ADV
基因表達(dá)
穩(wěn)轉(zhuǎn)/瞬轉(zhuǎn)
穩(wěn)轉(zhuǎn)
瞬轉(zhuǎn)
瞬轉(zhuǎn)
是否能感染可分裂的細(xì)胞
是否能感染不分裂的細(xì)胞
是否能整合到靶細(xì)胞基因組
靶細(xì)胞的免疫反應(yīng)
較低
非常低
病毒滴度
+++
++
+++
++++
轉(zhuǎn)染效率
+++
++
+++
++++


因此在選擇病毒載體時(shí),除了要考慮載體自身特征之外,如何包裝并獲取高滴度高活性的病毒載體對后續(xù)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要,針對病毒載體制備5大環(huán)節(jié),小美為您推薦如下解決方案↓


1. 病毒載體包裝質(zhì)粒系統(tǒng)
西美杰代理的美國Cell Biolabs公司推出的病毒包裝系統(tǒng)可滿足多種重組病毒包裝需求,包括四大類型病毒包裝質(zhì)粒AAV Helper Free System、ViraSafe? Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。

2. 病毒包裝試劑

A. 病毒包裝專用轉(zhuǎn)染試劑
西美杰代理的美國Mirus公司新推出的病毒包裝專用轉(zhuǎn)染試劑TransIT®-VirusGEN?與TransIT®-Lenti系列,專門針對AAV和Lentivirus設(shè)計(jì),相比傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率和病毒滴度,無動物源成分且兼容多種病毒包裝系統(tǒng)及不同細(xì)胞系類型。

品名
貨號
規(guī)格
適用病毒類型
TransIT®-VirusGEN? Transfection Reagent
MIR 6703
0.3/0.75/1.5mL
AAV & Lentivirus
TransIT®-Lenti Transfection Reagent
MIR 6603
0.3/0.75/1.5mL
Lentivirus


B. Lv/Rv包裝效率增強(qiáng)劑Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重組慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝過程,可促進(jìn)病毒基因組轉(zhuǎn)錄和RNA穩(wěn)定,使轉(zhuǎn)染效率提高10倍左右。

品名
貨號
規(guī)格
適用病毒類型
Lentivirus 10X Titer-Up
P906
1 mL
Lentivirus
Retrovirus 10X Titer-Up
P909
1 mL
Retrovirus


C. AAV/Adv病毒釋放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款無需反復(fù)凍融,即可從細(xì)胞中快速高效收獲AAV/Adv病毒以及其他非分泌型無囊膜病毒的試劑。

品名
貨號
規(guī)格
適用病毒類型
Virus-High® AAV / Adv Release Solution
P900
10 mL
AAV & Adv


3. 高效快速病毒濃縮試劑與純化試劑盒
西美杰代理的美國Cali-bio和Cell Biolabs品牌專門針對病毒載體設(shè)計(jì)的高效重組病毒濃縮純化試劑(盒),在獲得重組病毒高回收率的同時(shí)大大簡化操作流程,無需超速離心設(shè)備,是中小規(guī)模樣本純化的首選方案。

重組病毒類型
品名
貨號
特點(diǎn)
逆轉(zhuǎn)錄病毒
(Retrovirus)
Retrovirus Concentration Solution(5×) 
逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮試劑
CB300904
無需超速離心;
1小時(shí)內(nèi)病毒濃縮10-100倍; 
濃縮后病毒適用于各種細(xì)胞;
慢病毒
(Lentivirus)
Lentivirus Concentration Solution(5×) 
慢病毒濃縮試劑
CB300905
ViraBind? Lentivirus Purification Kit
VPK-104
操作時(shí)間< 2h,無需超速離心;
回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當(dāng)
腺相關(guān)病毒 
(AAV)
ViraBind? AAV Purification Kit 
(適用樣本量為2個(gè)10cm皿或1個(gè)15cm皿收獲的上清)
VPK-140
適用于純化AAV-2與AAV-DJ;
操作時(shí)間約3h;
ViraBind? AAV Purification Mega Kit 
(一次處理樣本量可達(dá)10個(gè)15cm皿收獲的上清)
VPK-141
獲得AAV純度>95%,回收率>60%
腺病毒
(ADV)
ViraBind? Adenovirus Miniprep Kit 
(適用樣本量為1個(gè)T75瓶或1個(gè)10cm皿收獲的上清)
VPK-099
采用特殊濾膜和離心柱;
操作時(shí)間約30min,無需超速離心;
ViraBind? Adenovirus Purification Kit 
(適用樣本量約為4個(gè)T75瓶收獲的上清)
VPK-100
回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當(dāng)


4. 病毒滴度檢測試劑盒
精確測定重組病毒滴度是提高下游實(shí)驗(yàn)可控性,重復(fù)性和準(zhǔn)確性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌針對不同病毒載體的特性分別設(shè)計(jì)的了多種滴度測定試劑盒,并且兼容了高效和精確的測定方法。

重組病毒類型
品名
貨號
特點(diǎn)
慢病毒
(Lentivirus)
Lentivirus Rapid Quantitation Kit
VPK-112
快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1010個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清
Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit
VPK-107
專利Pull-down技術(shù)分離出病毒相關(guān)P24蛋白,去除游離P24蛋白;
ELISA方法精確定量有活性的重組慢病毒滴度,避免傳統(tǒng)方法檢測總P24蛋白導(dǎo)致的誤差
Traditional p24 ELISA Kit
VPK-108-H
ELISA方法檢測總P24蛋白定量慢病毒滴度
逆轉(zhuǎn)錄病毒
(Retrovirus)
QuickTiter? Retrovirus Quantitation Kit
VPK-120
快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1.5×109個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清
腺相關(guān)病毒
(AAV)
QuickTiter? AAV Quantitation Kit
VPK-145
快速定量,操作過程<2h;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度;
靈敏度:純化前AAV可達(dá)109 GC/mL,對于純化后AAV可達(dá)5×1010 GC/mL
腺病毒
(ADV)
QuickTiter? Adenovirus Quantitation Kit
VPK-106
快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1010個(gè)病毒粒子/mL或100ul純化前上清
QuickTiter? Adenovirus Titer Immunoassay Kit
VPK-109
無需空斑形成實(shí)驗(yàn),避免復(fù)雜的鋪瓊脂步驟,操作更簡便;
傳統(tǒng)方法10天才可完成的實(shí)驗(yàn),用該試劑盒僅需2.5天,有ELISA和ICC兩種方法供選擇;
QuickTiter? Adenovirus Titer ELISA Kit
VPK-110
可用于所有41個(gè)血清型的腺病毒



5. 病毒感染增強(qiáng)試劑

西美杰代理的Cell Biolabs品牌還針對不同病毒載體研發(fā)了專用促病毒感染試劑,能顯著提高病毒對靶細(xì)胞的感染,進(jìn)而提高基因表達(dá)效率。

品名
貨號
規(guī)格
特點(diǎn)
ViraDuctin? Lentivirus Transduction Kit
LTV-200
40 次
復(fù)合型試劑能與慢病毒或逆轉(zhuǎn)率病毒形成復(fù)合物,與Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,適用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞
LTV-201
200次
ViraDuctin? Retrovirus Transduction Kit
RV-200
40次
RV-201
200次
ViraDuctin? AAV Transduction Kit
AAV-200
10次
有效提高重組AAV在多種細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染效率,包括傳統(tǒng)方法轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低的細(xì)胞和非分裂細(xì)胞,如原代細(xì)胞和干細(xì)胞。該試劑使用方便,僅需2h,是AAV轉(zhuǎn)染非分裂細(xì)胞的首選。
AAV-201
50次
ViraDuctin? Adenovirus Transduction Reagent
AD-200
10次
該試劑讓重組腺病毒感染不依賴于細(xì)胞的CAR(柯薩奇病毒-腺病毒受體)水平,可顯著提高病毒感染低CAR或無CAR表達(dá)的細(xì)胞,如原代細(xì)胞或干細(xì)胞,還可提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)效率
AD-201
50次


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